Pruebas relacionadas  
   El síndrome de Cushing debe estudiarse en dos etapas. Las pruebas iniciales van dirigidas a verificar que efectivamente existe un aumento de cortisol. Estas primeras pruebas incluyen una prueba en orina de 24 horas y una prueba de supresión con dexametasona (dosis baja y única). El segundo grupo de pruebas se utiliza para determinar la causa del aumento de cortisol (hipofisaria, adrenal u otra). Entre estas pruebas se incluye la prueba de supresión con una dosis alta de dexametasona, la prueba de estimulación con CRH y una o varias pruebas que permitan un diagnóstico por la imagen. 

Pruebas de laboratorio 
   Dado que los niveles de cortisol varian considerablemente a lo largo del día, un resultado aislado de cortisol es de poco o nulo valor, por lo que se requiere de otras medidas de evaluación de la producción total de cortisol. 

Cortisol en orina de 24 horas 
   También conocido como cortisol libre en orina, y a menudo utilizado para evaluar la producción total de cortisol. 

   Otra opción sería la de medir el cortisol a las 11 de la noche que, en condiciones normales, es cuando los niveles de la hormona son más bajos. Esto puede medirse en saliva o en sangre. Si esta prueba indica que el cortisol no varía según lo esperado sino que permanece elevado consistentemente, debe recurrirse a otras pruebas para determinar la causa que origina niveles altos de cortisol. 

Prueba de supresión con dexametasona 
   La dexametasona es un esteroide sintético que mimetiza la acción del cortisol, inhibiendo por retroalimentación la producción de CRH y de ACTH. Existen diferentes modalidades de esta prueba de supresión que se usa para confirmar el diagnóstico del síndrome de Cushing. Una respuesta normal a la dexametasona consiste en la supresión de la secreción del cortisol. Los pacientes con síndrome de Cushing (cualquiera que sea la causa) no presentan una supresión adecuada de la secreción de cortisol después de una dosis baja y única de dexametasona, administrada en el momento de acostarse. 

   Puede también administrarse dosis más elevadas de dexametasona durante un período de 48 horas para distinguir entre un tumor hipofisario productor de ACTH y otras posibles causas de síndrome de Cushing.

Prueba de estimulación con CRH 
   En esta prueba se inyecta CRH (hormona liberadora de la corticotropina) y se mide los niveles de ACTH y de cortisol a distintos tiempos: justo antes de administrarse la CRH (nivel basal) y a los 30 y 60 minutos de haberla administrado. La respuesta normal supone un pico de los niveles de ACTH a los 30 minutos, seguido de un pico de los niveles de cortisol a los 60 minutos. La mayoría de pacientes con síndrome de Cushing, ya sea por tumores adrenales o por tumores que generan una secreción ectópica de ACTH, no responde a la administración de CRH. La ACTH puede medirse en muestras de sangre obtenidas mediante un catéter colocado en los senos petrosos inferiores, que son unas formaciones venosas que transportan la sangre procedente de la hipófisis.

Otras pruebas complementarias

• Tomografía computerizada (TC) – para localizar los tumores adrenales, hipofisarios y ectópicos
• Resonancia magnética nuclear (RMN) – a veces solicitada para evaluar el estado de las glándulas adrenales y pituitaria
• Ultrasonidos